AAV磁珠纯化试剂盒

所属分类：试剂盒产品

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产品列表（共 2 个）

{"display_name":"AAV磁珠纯化试剂盒","page_subtitle":"AAV Magnetic Bead Purification Kit","cta_title":"立即咨询","cta_subtitle":"如需获取AAV磁珠纯化试剂盒产品方案或定制服务，欢迎联系我们","cta_btn_text":"联系我们","cta_btn_url":"/contact.html","overview":"

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腺相关病毒（Adeno-Associated Virus ，AAV）是Parvovirus科Dependovirus属的无包膜病毒，病毒颗粒直径 18-26 nm，基因组大小约4.7 kb。血清型众多，不同血清型病毒间的宿主特异性和特点有所不同。重组 AAV载体（rAAV）具有低致病性,对宿主免疫原性弱，长期稳定表达，广泛的细胞和组织亲嗜性等优点，经过工程改造后的重组腺相关病毒(rAAV)被视为最有前途的基因治疗载体，已成为体内输送基因疗法的主要平台。
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AAV病毒颗粒的纯化通常使用碘克沙醇密度梯度离心，操作繁琐，耗时长且回收率低。 AAV磁珠纯化试剂盒可以在大约1h完 成 病 毒 纯 化，适 用 于 多 种 血 清 型，操 作 简 单 、快 速 且 纯 化 率 高，纯 化 所 得 的 病 毒 颗 粒 可 直 接 用 于 下 游 实 验 。
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","advantage":"
  1. 应用范围广：适用于多种血清型（已针对AAV8和AAV9血清型进行了验证）；
  2. 操作简便：无需进行超离心等繁琐操作，对仪器设备要求低；
  3. 实验周期短：整个纯化过程仅需1个小时即可完成；
  4. 磁珠载量大：亲和磁珠结合载量可达3-5E+11 vg/mg。
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实验材料（需要自备）
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磁力架、滤膜、注射器、EP管、超滤浓缩管、细胞培养所需仪器耗材
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操作流程

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1、AAV病毒收集及粗纯（供参考）
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①收集病毒上清，用PEG沉降过夜，10000rpm离心30min，重悬沉淀；\n
②收集包装细胞沉淀，冻融或研磨裂解细胞，高速离心后取上清；\n
③将①②的病毒上清混合，滤膜过滤去除细胞碎片等，粗纯样本完成，用于后续纯化或-80℃暂存。
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2、清洗磁珠
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取适量磁珠置于磁力架上静置1min（100ul磁珠结合约1E+12vg粗纯病毒），吸去上清，加入3倍磁珠体积 Buffer 1吹打重悬，再将悬液置于磁力架上静置1min，弃上清，重复洗涤3次。
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3、AAV样品孵育和洗杂
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将粗纯AAV样本加到磁珠中，将悬液垂直混匀孵育30min，孵育结束后将离心管置于磁力架上，磁吸2min，将上清液转移到干净的离心管中留样。在离心管中加入与样本等体积的Buffer 1缓冲液进行清洗，充分吹打混匀后磁吸2min，弃去上清，此步骤重复3次，分管收集洗涤液，留样备检。
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4、 AAV样品洗脱
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洗杂后的磁珠中加入与样本等体积的Buffer 2，垂直混匀洗脱10min，重复洗脱3次。洗脱后样本立即加Buffer 3，每1mlBuffer 2 加20ul Buffer 3（样本颜色由黄色变为红色即为完成），分管收集洗脱液，鉴定病毒颗粒量及纯度。
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5、 AAV病毒浓缩和buffer置换
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将含有AAV病毒的洗脱液转移至超滤浓缩管（30KD）进行Storing buffer置换，并浓缩至所需体积；浓缩病毒使用0.22um滤膜过滤除菌，分装后置于-80℃条件下保存。
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1.因受病毒包装效率影响，建议确定病毒包装滴度，在磁珠核载范围内进行纯化；\n
2.粗纯样本建议加核酸酶处理，降低样品粘性和浊度，避免影响结合效率；\n
3. 磁珠在2-8℃保存，避免冻结；\n
4.受到 qPCR定量方法不同的影响，测得的拷贝数和核载效率会有差异，建议可以设置用量梯度验证纯化效率。
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