腺病毒滴度检测试剂盒
所属分类：试剂盒产品
{"display_name":"腺病毒滴度检测试剂盒","page_subtitle":"Adenovirus Titration Detection Kit","cta_title":"立即咨询","cta_subtitle":"如需获取腺病毒滴度检测试剂盒产品方案或定制服务，欢迎联系我们","cta_btn_text":"联系我们","cta_btn_url":"/contact.html","overview":" \n 本试剂盒用于快速定量腺病毒滴度，相比于标准的测定方法，使用该试剂盒可以快速得到检测结果(约 48 小时)且效果相当。腺病毒感染 HEK293 细胞后表达六邻体蛋白质 Hexon，感染腺病毒的细胞使用甲醇固 定后，用腺病毒六邻体蛋白特异性抗体进行标记、染色、计数，利用公式计算得到病毒滴度。 \n ","advantage":" 检测周期短： 只需48小时即可快速完成腺病毒滴度测定（传统空斑法实验周期需10天以上）； 操作简便： 只需3步即可完成操作，过程无需预实验、纯化等繁琐操作； 结果直观： 感染了腺病毒的细胞显色明显，易于统计分析。 ","service_c
产品列表（共 1 个）
{"display_name":"腺病毒滴度检测试剂盒","page_subtitle":"Adenovirus Titration Detection Kit","cta_title":"立即咨询","cta_subtitle":"如需获取腺病毒滴度检测试剂盒产品方案或定制服务，欢迎联系我们","cta_btn_text":"联系我们","cta_btn_url":"/contact.html","overview":"
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本试剂盒用于快速定量腺病毒滴度，相比于标准的测定方法，使用该试剂盒可以快速得到检测结果(约 48小时)且效果相当。腺病毒感染 HEK293 细胞后表达六邻体蛋白质 Hexon，感染腺病毒的细胞使用甲醇固定后，用腺病毒六邻体蛋白特异性抗体进行标记、染色、计数，利用公式计算得到病毒滴度。
\n","advantage":"
- 检测周期短：只需48小时即可快速完成腺病毒滴度测定（传统空斑法实验周期需10天以上）；
- 操作简便：只需3步即可完成操作，过程无需预实验、纯化等繁琐操作；
- 结果直观：感染了腺病毒的细胞显色明显，易于统计分析。
","service_content":"
检测原理
本试剂盒采用免疫荧光法：通过腺病毒感染HEK293细胞后表达六邻体蛋白Hexon，感染腺病毒的细胞使用甲醇固定后，用腺病毒六邻体蛋白特异性抗体进行标记、染色、计数，利用公式计算得到病毒滴度。
","serotype_info":"
实验流程
腺病毒稀释后感染HEK293细胞48 h，再通过固定、标记、染色、计数等步骤，通过公式计算出腺病毒滴度结果，最后达成腺病毒定量的目的。
实验数据
用不同稀释度的腺病毒感染HEK293细胞，通过腺病毒滴度检测试剂盒进行检测。建议使用10⁻⁵稀释作为细胞计数范围。
","usage_guide":"\n
一、 感染细胞\n
1、选取状态良好的 HEK293 细胞，使用 DMEM + 10% FBS 培养基重悬细胞（2.5 x 10\n5 cells/ml），24 孔板每个孔中加入 1mL 细胞悬液，37°C、5% CO2 培养 1 小时。
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2、使用 PBS 或 DMEM 培养基作为稀释液，将病毒样品 10 倍梯度连续稀释病毒样品，从 10-2至 10-6 ml。标记为 10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7。
3、将 10\n-2至 10\n-7稀释病毒液加入 24 孔板中，每孔加入 100µL 病毒稀释液，37℃、5%CO2培养 48h。\n
二、 试剂配制\n
1、1% BSA+PBS 溶液：用 PBS 稀释 BSA，于 100ml PBS 中加 1g BSA 粉末，4℃保存；\n
2、一抗工作液：将 Mouse Anti-Hexon Antibody 按 1：1000 稀释于 1% BSA+PBS 溶液中，置于冰上备用；\n
3、HRP 二抗工作液：将 Goat Anti-Mouse Antibody (HRP conjugate)按 1：1000 稀释于 1%BSA+PBS 溶液中，置于冰上备用；
4、DAB 工作液：按 1：1 的比例依次加入 DAB 显色液 A、显色液 B，混匀配制成 DAB 染色工作液；\n
注：DAB 工作液需新鲜配制，尽量在 30min 内使用。
三、标记\n
1、细胞感染 48h 后，去除培养液，沿 24 孔板侧壁缓缓加入 0.5mL/孔预冷甲醇，-20℃ 固定 20min；弃去甲醇，用 1mL PBS 轻轻冲洗细胞 3 次（避免细胞脱落），然后加入 500µL/孔的 1% BSA+PBS 溶液，37℃封闭 1 小时。
2、弃去封闭液，加入 200µL/孔的一抗工作液，37℃孵育 1 小时；弃去一抗工作液，用 PBS 轻轻冲洗细胞3 次（避免细胞脱落），然后加入 200µL/孔的 HRP 二抗工作液，37℃孵育 1 小时。
3、弃去 HRP 二抗工作液，用 PBS 轻轻冲洗细胞 3 次，然后加入 200µL/孔新配制的 DAB 工作液，室温孵育5-10min。
4、弃去 DAB 工作液，使用 PBS 清洗 2 次，然后每孔加入 1mL 的 PBS；每孔随机选择至少 5 个视野，在光学显微镜下观察计数，计算每孔阳性细胞的平均个数。
四、病毒滴度计算\n
1、理想的视野内应包含 5-50 个阳性细胞，随机选择至少 5 个区域计数（为了最大限度提高准确性，应尽量做多个重复）。
2、计算 24 孔板中每孔视野的个数：\n
eg. 标准 10x 目镜与 20x 物镜所观察到的视野直径为 0.9mm，故每个视野的面积=3.14*0.2025≈0.64mm\n2。
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3、滴度计算：每孔的感染单位(IFU)/mL=[(平均阳性细胞/孔)*（视野数/孔）]÷[病毒体积(mL）*稀释倍数]。
eg. 在200x显微镜下5个视野中计算的阳性细胞平均数为28，此孔病毒稀释了10\n6倍，则病毒滴度＝28*313*106÷10\n-1=8.76E+10（IFU/mL）。
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