腺病毒纯化试剂盒
所属分类：试剂盒产品
{"display_name":"腺病毒纯化试剂盒","page_subtitle":"Adenovirus Purification Kit","cta_title":"立即咨询","cta_subtitle":"如需获取腺病毒纯化试剂盒产品方案或定制服务，欢迎联系我们","cta_btn_text":"联系我们","cta_btn_url":"/contact.html","overview":" \n Ad5 纯化试剂盒适用于快速高效地纯化和浓缩重组腺病毒， Ad5 纯化试剂盒利用离子交换原理，操作简单， 且安全有效。可纯化 15~18 × 10cm 培养皿（约 1.0E+12VP ）的病毒颗粒，操作时间仅需 60min~90min 。 \n ","advantage":" 产物优质： 所分离的病毒颗粒结构完整且生物活性良好； 操作简便： 无需依赖特殊仪器设备，仅需60~90 min内即可完成病毒颗粒收集； 回收率高： 纯化效果好，可以一次获得较纯病毒颗粒。 ","service_content":"","serotype_info":"","usage_guide":" \n
产品列表（共 2 个）
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Ad5 纯化试剂盒适用于快速高效地纯化和浓缩重组腺病毒，Ad5 纯化试剂盒利用离子交换原理，操作简单，且安全有效。可纯化 15~18×10cm 培养皿（约 1.0E+12VP）的病毒颗粒，操作时间仅需 60min~90min。
\n","advantage":"
- 产物优质：所分离的病毒颗粒结构完整且生物活性良好；
- 操作简便：无需依赖特殊仪器设备，仅需60~90 min内即可完成病毒颗粒收集；
- 回收率高：纯化效果好，可以一次获得较纯病毒颗粒。
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一、收获腺病毒\n
1、 当约 50%的细胞出现 CPE 时（观察到 50%细胞呈圆形聚集漂浮在培养基中，其余细胞粘附且完整）\n
收集细胞和上清至 50mL 离心管中。\n
注：腺病毒快速滴度检测试剂盒可用于在细胞病变效应(CPE)形成之前进行监测。\n
2、4℃，3000×g 离心 5min 收集细胞，丢弃上清，留细胞沉淀。\n
3、每 10×10cm 培养皿细胞量使用 1mL storing buffer 重悬。\n
4、细胞重悬液在液氮/-80℃冰箱和 37℃水浴中重复冻融三次（或使用细胞研磨仪）。\n
5、最后一次解冻后，细胞重悬液离心（离心条件：4℃，10000g，5min）去除细胞碎片，收集上清液。\n
6、使用 0.45um 滤膜过滤上清，过滤后的病毒液可以进行纯化或-80℃保存。\n
注：可以选择加入 Benzonase Nuclease，37℃ 孵育 1h，降低了溶液的粘度，有利于通过纯化柱。
二、平衡纯化柱\n
7、将 Ad5 纯化柱放置在 50ml 离心管中，离心（离心条件：4℃、50×g、1min）去除气泡。\n
8、拧开 Ad5 纯化柱的底部封盖，让保存液依靠重力流下或离心（离心条件：4℃、50×g、1min）。\n
9、用 15mL buffer A 平衡 Ad5 纯化柱两次，依靠重力流下或离心（离心条件：4℃、50×g、1min），至\n
纯化柱中无液体即可。
三、Ad5 纯化柱上样病毒上清液\n
10、使用 buffer A 将病毒液按照比例（1×10cm 培养皿细胞补充体积至终体积 1mL）进行稀释。
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11、将稀释后的病毒液装入 Ad5 纯化柱，依靠重力流下或离心（离心条件：4℃、20×g、1min），让病\n
毒液逐渐通过 Ad5 纯化柱，继续加载直到所有病毒液通过 Ad5 纯化柱。（可将流穿液重新加载上柱一次，\n
以获得最大的病毒颗粒结合量。）\n
四、清洗杂蛋白及洗脱病毒颗粒\n
12、用 15mL buffer B 清洗 Ad5 纯化柱，离心（离心条件：4℃、20×g、1min），至纯化柱中无液体即可。\n
13、用 15mL buffer C 洗脱病毒，依靠重力流下或离心（离心条件：4℃、20×g、1min）至纯化柱中无液\n
体，收集 15ml 洗脱液。\n
注：可重复一次上述步骤，进行 2 次洗脱，确定滴度和纯度后可合并浓缩。
五、脱盐和缓冲液交换\n
14、洗脱液使用 100KD 超滤浓缩管置换 storing buffer，-80℃储存。\n
（1）转移步骤 13 中 15ml 样品至超滤浓缩管中，4℃离心，5000rpm，至超滤浓缩管中剩余液体约 1ml，\n
弃滤液，补加 9ml storing buffer 到超滤浓缩管中。\n
（2）重复上述步骤 1 次，至超滤浓缩管中约 1mL 左右，用移液枪在超滤浓缩管滤膜上反复吹打数次，收\n
集纯化的病毒。\n
注：纯化后的病毒建议分装储藏在-80℃，避免反复冻融。
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\n","storage":"\n
4℃~8℃保存，有效期 1 年。
\n","precautions":"\n
1、纯化和保存过程中，应始终保持纯化介质湿润。\n
2、首次使用前，应先离心 50×g，1min，去除运输过程中产生的气泡。\n
3、 离心条件仅为参考条件，使用时可视剩余液体体积选择延长或缩短离心时间。\n
4、上柱纯化前，样品溶液使用 0.45um 的滤膜过滤。
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